膀胱癌与P16基因缺失关系的探讨

　　CGTCCTCCAGAGTC-3′，扩增长度为316 bp；外显

　　子2的引物顺序为：有意义链5′-TGGCTCTGAC-

　　CATTCTGT-3′〔5〕，无意义链5′-CTGAGCTTTG-

　　GAAGCTCTC-3′〔6〕，扩增长度为388 bp。将H-ras基因作为内对照，引物顺序为：有意义链5′-GGCAGGAGACCCTGTAGGAG-3′〔7〕，无意义链5′-CGCCAGGCTCACCTCTATAGT-3′〔8〕，扩增长度为172 bp。引物均由上海Sangon合成，经聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化。扩增体系为25 μl，dNTP(100 mmol/L)1 μl，MgCl2(25 mmol/L)1.5 μl,10×buffer(Mg2加free)2.5 μl，Taq酶1 μl(1×106 u/L)(以上试剂均购自上海Sangon)，四种引物各1 μl(25 μmol/L)，DNA模板50～100 ng，矿物油16 μl。在DNA扩增仪(PTC-100 TM，MJ Research Inc)上进行反应。循环条件为95℃反应30 s，60℃反应1 min，72℃反应50 s。循环30次，再72℃反应10 min。

　　1.4　PCR扩增产物电泳

　　PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，结束后拍照。

　　2　结果

　　31例膀胱癌病理分级和临床分期分别为Ⅰ级4例，Ⅱ级17例，Ⅲ级7例，Ⅳ级3例；Ta期5例，T1期14例，T2期9例，T3～4期3例。

　　31例膀胱癌标本中P16基因外显子1和2共发现7例缺失，缺失率为22.6%，其中Ⅰ级1个，Ⅱ级4个，Ⅲ级2个；Ta期1个，T1期4个，T2期1个，T3期1个。各对引物的扩增大小与设计一致。

　　3　讨论

　　P16基因作为一种抑癌基因已为人们广泛接受。P16基因定位于9P21上，全长8.5 kb，由2个内含子和3个外显子间隔组成。外显子1为126 bp，外显子2为307 bp，外显子3为11 bp，编码相对分子量为15 84

 
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