拉咪呋定是有效的抗乙型肝炎病毒(HBV)药物，已在临床广泛应用，但可因YMDD变异而耐药。对拉咪呋定的耐药机制，国外学者从不同的角度进行了研究：有些学者认为拉咪呋定治疗过程中出现YMDD变异后HBVDNA多聚酶的结构发生改变，与拉咪呋定的结合能力下降而致它的耐药;而且在未进行拉咪呋定治疗的患者的血清中检测出YMDD变异株，但未见拉咪呋定治疗患者的病毒株组成分析的报导。本文克隆分析了拉咪呋定治疗前和治疗48W时病毒株的变化与临床之间的关系，进一步探讨拉咪呋定的耐药机制。

　　材料与方法

　　1.患者与血清标本：根据2000年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案，5例上海地区慢性HBV感染者(表面抗原阳性，DNA斑点法阳性，病程6个月以上)用拉咪呋定100mz/日口服治疗，治疗48W时HBV DNAPCR仍阳性，选择治疗前与治疗48周的血清标本进行分析。

　　2.方法

　　2.1 HBV血清标志及核酸检测：血清中乙型肝炎病毒表面抗原/抗体(HBsAg/HBsAb)及乙型肝炎病毒e抗原/抗体(HBeAg/HBeAb)用微粒酶免疫方法检测(Axsym，Abbett，USA)，HBV DNA用斑点杂交法(治疗前)和bDNA信号扩增法(治疗过程中)检测。

　　2.2 血清HBV DNA的抽提与扩增：蛋白酶K裂解，酚、氯仿抽提，酒精沉淀。扩增包括YMDD区域在内的片段长度为500bP，引物为S2(5’—TATGTTGCCCGTTTGTCCTC—3’，nt462-481)，AIT(5-CCTATTCATTGGAAAGTATGTCA3’nt972-994);扩增条件为：94C5mins变性后循环温