性病常识
788-769
F1 CTCTTCAAGGAGCTCAT 222-206
Tpf-1F2 AGACAGTGGTTATGCTC 77-61
或tyf-1F3(探针) ATTGCGCCAGCATGTAG 114-130
F4(探针) ATTGCGCCGGCATGTAG 114-130
(二)操作方法
1、采集标本,根据病人的情况可采取局部分泌物,抽取淋巴结液,羊水,血清,脑脊液。用适量的蒸馏水稀释,保存于4℃冰箱。
2、标本处理:目的是为了暴露梅毒螺旋体的DNA,消除标本对PCR的抑制物。采用下列处理方法。
①煮沸法:取10或20μl血清或CSF放入0.5ml微量离心管中,水浴煮10min后在冰浴中冷却,13000g离心10s,上清用作PCR分析。
②低速离心法:将100μl羊水,血清或脑脊液加入到900μl无菌磷酸缓冲液中,10000g室温离心10min,上清转入另外的微量离心管中,20000g4℃离心1h,弃上清,沉淀悬浮于50μl
无菌水中,直接煮沸10min,冰浴冷却,取40μl上清作PCR。
③碱裂解
F1 CTCTTCAAGGAGCTCAT 222-206
Tpf-1F2 AGACAGTGGTTATGCTC 77-61
或tyf-1F3(探针) ATTGCGCCAGCATGTAG 114-130
F4(探针) ATTGCGCCGGCATGTAG 114-130
(二)操作方法
1、采集标本,根据病人的情况可采取局部分泌物,抽取淋巴结液,羊水,血清,脑脊液。用适量的蒸馏水稀释,保存于4℃冰箱。
2、标本处理:目的是为了暴露梅毒螺旋体的DNA,消除标本对PCR的抑制物。采用下列处理方法。
①煮沸法:取10或20μl血清或CSF放入0.5ml微量离心管中,水浴煮10min后在冰浴中冷却,13000g离心10s,上清用作PCR分析。
②低速离心法:将100μl羊水,血清或脑脊液加入到900μl无菌磷酸缓冲液中,10000g室温离心10min,上清转入另外的微量离心管中,20000g4℃离心1h,弃上清,沉淀悬浮于50μl
无菌水中,直接煮沸10min,冰浴冷却,取40μl上清作PCR。
③碱裂解

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