性病常识

生殖就医指南网 2007-9-10平安健康网

法：取收集标本100μl加于含1mol/L NaCl,1mol/L 
    NaOH和0.1%SDS的溶液中煮沸1.5min,用400μl（0.5mol/L）Tris-HCl(pH8.0)中和。用相同体积的苯酚抽提，再以100μl 
    0.15mol/L 
    NaCl抽提苯酚。整个600μl的溶液用相同体积的氯仿：异戊醇（24：1）抽提，然后用相同体积的异丙醇沉淀（-20℃过液）。13000g4℃离心15min，轻轻倒出上清，凉干。沿淀悬浮于51μl无菌水中，取20μl作PCR模板。 


    　　（三）PCR扩增 

    　　1、扩增47KDa膜抗原基因:100ml反应物含：10mmol/L TrisHCl(pH8.3),50mmol/L 
    KCl，3mmol/L MgCl2,100μg/ml明胶，0.5μg引物(47-1和47-2),75mmol/LdNTPs,2.5U 
    TaqDNA聚合酶。取不同量各种制备的DNA作模板,反应过程:94℃15s， 60℃1min, 
    72℃1min,循环40次,末次循环增加72℃10min延伸时间,取10ml反应物用1% 
    琼脂糖凝胶电泳分析。点杂交分析产物：取10mlPCR扩增产物加入10ml0.5mol/LNaOH-1.5mol/NaCl溶液中变性10min,用380μ11.5mol/L 
    NaCl-1mmol/L Tris(pH7.2)中和,然后用Minifold 
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