性病常识

生殖就医指南网 2007-9-10平安健康网

bsp;I点膜,80℃真空处理膜2h,用496bp探针65℃杂交过夜。探针为引物47-3和47-4的PCR产物,用随机引物法标记. 

    　　2、扩增39KDa碱性膜蛋白基因:25μ1反应体系含:1×RT缓冲液,50mmol/L 
    Tris-HCl(pH8.5),50mmol/LNaCl,4mmol/LMgCl2,2mmol/L 
    DTT(二硫基苏糖醇),200μmol/L 
    dNTP,100μmol/L引物(TP7和TP8)，0.01%牛血清白蛋白(无DNase和RNase),1UTaqDNA聚合酶,5μ1样品,可加入0.05mmol/L四甲胺化氯增强PCR。 


    　　PCR1:先用引物TP7和TP8扩增出617bp片段,反应过程:94℃3min后进入循环过程:94℃1min,65℃1min,72℃1min,循环数为30或35,每一循环中72℃延伸递增5s,最后一次延伸时间延长到6min. 


    　　PCR2:再用巢居引物TP3和TP4扩增出500bp片段,PCR1产物用蒸馏水稀释10倍,取5μ1用作第二次扩增.PCR2中MgCl2和引物浓度分别为5mmol/L和20μmol/L引物(TP3和TP4),其它条件与PCR1相同。 


    　　PCR产物分析。①取10μ1反应产物用2%琼脂糖凝胶电泳；②Southern印迹后,用寡核苷酸探针TP5(以32P作末端标记)杂交。 


    　　3、扩增TpF1蛋白基因TyF1蛋白基因:100μ1反应物含:50mmol/L KCl,10mmol/L 
    Tris-HCl(pH8.4),2

 
[1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] 
[11] [12] [13] [14] [15] [16] [17] [18] [19] [20] 
[21] [22] [23] [24] [25] [26] [27] [28] [29] [30] 
[31] [32]